ELISA testi çok sayıda hastalığı tespit eder, bu nedenle tıpta ve daha fazlasında geniş uygulama alanı bulmuştur. Bununla birlikte, ELISA testi en iyi Lyme hastalığı teşhisi ile bilinir. ELISA testi nedir? Sonuçlar nasıl yorumlanır? Testin fiyatı nedir?
İçindekiler:
- ELISA testi - neyi tespit eder? ELISA testinin uygulanması
- ELISA testi - test nedir?
- ELISA testi ve Lyme hastalığı - ne zaman yapılır?
- ELISA testi - fiyat. ELISA testinin maliyeti nedir?
- ELISA testi - sonuçlar. Yanlış pozitifler olabilir mi?
- ELISA testi - sonuçlar. Yanlış negatif olabilirler mi?
ELISA testi, yani enzime bağlı immünosorbent testi, diğerleri arasında hizmet veren yaygın olarak kullanılan bir laboratuvar yöntemidir. kandaki antikorların kantitatif tespiti için.
Bu nedenle ELISA testi, Lyme borreliosis gibi bakteriyel hastalıkların teşhisinde uygulama bulmuştur.
ELISA yönteminin avantajı basitliği ve hızlı uygulama olasılığı ve yüksek hassasiyettir. ELISA yöntemi, örneğin Borrelia proteinleri (antijenler) ve bir hasta örneğindeki antikorları tespit etmek için tasarlanmış spesifik monoklonal antikorlar ile doldurulmuş oyuklara sahip özel plastik plakalar kullanılarak gerçekleştirilir.
ELISA testi - neyi tespit eder? ELISA testinin uygulanması
ELISA yönteminin yüksek duyarlılığı ve basitliği, onu birçok hastalığın teşhisinde uygulanabilir kılmıştır, ancak en iyi Lyme hastalığının teşhis yöntemi olarak bilinir.
Lyme borreliosis teşhisi durumunda, sözde dolaylı ELISA, test edilen materyalde spesifik IgM veya IgG'yi tespit etmeye izin verir. Aynı şekilde, teşhis için antikorlar da tespit edilebilir:
- viral enfeksiyonlar: herpes virüsleri (herpes, herpes zoster virüsü, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, hepatit virüsleri (HBV ve HCV)
- protozoan enfeksiyonları: toksoplazmoz, giardiasis
- otoimmün hastalıklar: çölyak hastalığı (anti-tTG veya anti-DPG antikorları), Hashimoto hastalığı (anti-TG ve anti-TPO antikorları), inflamatuar bağırsak hastalıkları (anti-ASCA ve anti-ANCA antikorları)
- spesifik IgE antikorlarının tespit edildiği paraziter hastalıklar ve alerjiler. Artan seviyeleri, örneğin polen ve gıdaya veya parazit istilasına (silahlı tenya, insan yuvarlak kurdu) alerjilerin varlığını gösterebilir.
ELISA yönteminde (sözde sandviç ELISA), antikorlardan başka bir protein numunesinin tespitine izin veren modifikasyonlar da vardır. Daha sonra testin amacı biyolojik materyalde tespit etmektir:
- virüs veya bakteri parçaları, çoğu zaman belirli bir patojen için karakteristik antijenlerdir
- serum hormonları, örneğin östrojen, prolaktin, TSH, fT4, kortizol
- enzimler, örneğin kalprotektin, pankreas elastazı, alkalin fosfataz
- tümör belirteçleri, örneğin CA-125
- serumda ilaç varlığı
Bu yöntem aynı zamanda gıdalardaki alerjen (örn. Süt, yer fıstığı), GDO'lar veya toksinlerin izlerini tespit edebildiği gıda endüstrisinde de uygulanabilir.
ELISA testi - ne hakkında?
Örneğin, ELISA yöntemi kullanılarak Lyme borreliyozunun teşhisi, biyolojik materyaldeki immün proteinlerin - Borrelia antijenlerine karşı yanıt sırasında ortaya çıkan antikorların - saptanmasından oluşur.
Antikorlar, IgM ve IgG olmak üzere iki sınıfta test edilir. IgM'ler, bakterilerle temas ettiklerinde vücutta ortaya çıkan ilk antikorlardır ve zamanla azalırlar.
Onların yerini, vücutta birkaç düzine yıl kalabilen daha kalıcı IgG antikorları alıyor.
Bu şekilde, vücuttaki bakteri varlığı, özellikle Borrelia spiroketlerine karşı yönlendirilmiş antikorlar tespit edilerek dolaylı olarak test edilir.
Çeşitli enfeksiyon aşamalarındaki antikorlar, çeşitli Borrelia proteinlerine karşı yönlendirilebilir. Örneğin, erken bir aşamada p41 proteinidir.
Sonraki aşamalarda, p21, p30, p39, p43 gibi giderek daha fazla protein ortaya çıkmaya başlar. Bu nedenle Lyme hastalığının teşhisi son derece zordur.
Bakteriyel proteinlerin seçimi, testin yüksek tanısal değere sahip olması için son derece önemlidir. Bu nedenle, Lyme hastalığının tanısında rutin olarak en güvenilir sonucu elde etmek için protein setlerinin seçildiği II-kuşak veya III-kuşak ELISA testleri kullanılmalıdır.
ELISA testi ve Lyme hastalığı. Ne zaman yapmalı?
Lyme borreliosis, Borrelia burgdorferi bakterisinin ve birçok çeşidinin neden olduğu bakteriyel bir hastalıktır.
Borrelia'ya karşı immün yanıtın karmaşıklığı ve laboratuvar yöntemlerinin kusurları nedeniyle hastalığın teşhisi kolay değildir.
En yaygın kullanılan laboratuvar yöntemi, bakteriyel proteinlere karşı oluşturulan spesifik antikorları tespit eden oldukça hassas ELISA yöntemidir.
Lyme borreliosis tanısında, aşağıdaki aşamaların ayırt edildiği dolaylı bir ELISA yöntemi kullanılır:
- hastadan toplanan materyal, örn. serum ile plaka üzerindeki oyukların inkübasyonu. Test edilen materyalde Borrelia'ya karşı antikorlar varsa, reaksiyonun altındaki proteinlere bağlanırlar.
- daha sonra fazla serum özel bir yıkama sıvısı (tampon) ile durulanır ve konjugat, yani reaksiyon kuyularında önceden bağlanmış antikorlara bağlanan bir enzime bağlı bir antikor
- daha sonra konjugat için substrat eklenir ve bir renk reaksiyonu oluşur (pozitif sonuç) veya renk reaksiyonu olmaz (negatif sonuç)
- son adım, hastanın serumunda Borrelia'ya karşı antikor konsantrasyonunun okuyucu (spektrofotometre) tarafından okunmasıdır.
Lyme hastalığı için ELISA yöntemi kandan ve nörolojik semptomlar (nöroborelyoz) durumunda da beyin omurilik sıvısından yapılır.
Yanlış pozitif sonuç olasılığı yüksek olduğundan sinoviyal sıvı test edilmemelidir.
Hastalığın teşhisinin temeli, onu gösteren ve laboratuvar testlerinin sonuçlarıyla doğrulanan klinik semptomlardır.
Sağlıklı insanlarda Borrelia'ya karşı antikorların da tespit edildiği gösterildiğinden, semptomsuz bir laboratuvar test sonucunun eklenmesi Lyme hastalığının teşhisine izin vermez.
Lyme borreliosis'in serolojik teşhisi, yarı kantitatif tarama ELISA testi ile başlar. Sonuç negatifse, bu Borrelia spiroketinin tespit edilmediği veya sonucun yanlış negatif olduğu anlamına gelir.
Sonuç pozitif veya zayıf pozitif ise (şüpheli), yüksek özgüllük ile karakterize edilen doğrulayıcı Western blot testi yapılmalıdır.
Bu, ELISA sonuçlarının "doğru" olduğunu doğrulamak içindir. Teşhis sırasında, yukarıdaki adımlardan herhangi birini atlayamaz ve örneğin Western blot yöntemini kullanarak hemen teşhis gerçekleştiremez veya tek başına pozitif ELISA sonucuna dayalı bir teşhis koyamazsınız.
Polonya'da Lyme hastalığının teşhisi çoğu zaman ilk tarama aşamasında sona erer ve bu da pozitif veya zayıf pozitif sonuçların yanlış yorumlanmasına neden olur.
Önerilen makale:
Lenfosit transformasyon testi (LTT) Bilmekte fayda varELISA testi - fiyat. ELISA testinin maliyeti nedir?
Test yaklaşık 60 PLN tutarındadır ve hemen yapılır. Ancak, sevkin sonuçları için yaklaşık üç ay bekleyebilirsiniz.
ELISA testi - sonuçlar. Yanlış pozitifler olabilir mi?
Hatalı pozitif sonuçlar, IgM antikorlarının diğer proteinlerle çapraz reaktivitesinden kaynaklanır. Vücut tarafından üretilen antikorlar, diğer mikroorganizmalardan gelen bir antijeni Borrelia antijeni olarak "yanlış" tanıyabilir.
En yaygın "hatalar", treponema pallidum, herpesvirüsler ile enfekte kişilerde ve sistemik lupus eritematozus ve diğer romatizmal hastalıkları olan kişilerde meydana gelir.
ELISA testi - sonuçlar. Yanlış negatif olabilirler mi?
Yanlış negatif sonuçlar enfeksiyonun erken bir aşamasında görünebilir, bu durumda test yaklaşık 3-4 hafta sonra tekrarlanmalıdır. Bu denir serolojik pencere, yani vücudun spesifik antikorları üretmeyi henüz "başaramadığı" enfeksiyonun ilk dönemi.
Aynı şekilde, yeterli antikor üretmeyen immün yetmezliği olan kişilerde.
Özellikle çok yoğun enfeksiyonlarda büyük bir sorun, sözde enfeksiyonun ortaya çıkmasıdır. Borrelia spiroket antijenleri ve bunlara özgü antikorlardan oluşan bağışıklık kompleksleri.
Sonuç olarak antikorlar, ELISA gibi yaygın olarak kullanılan yöntemler için "görünmez" hale gelir ve test edilen materyalde bulunmalarına rağmen, tespit edilemezler.
Bu gibi durumlarda, laboratuvar bağışıklık komplekslerini parçalayabilir. Bu tedavi, antikorları serbest bırakmak için tasarlanmıştır. Ancak, laboratuvarlarda standardizasyon eksikliği nedeniyle bu yöntem yaygın olarak kullanılmamaktadır.
Bilmeye değerLyme hastalığının teşhisi neden kolay değil?
Bu, Borrelia'ya karşı bağışıklık tepkisinin karmaşıklığından ve laboratuvar yöntemlerinin sınırlamalarından kaynaklanmaktadır. Özellikle Avrupa kıtasında çeşitlerin çeşitliliği ve enfeksiyonlara neden olan yenilerinin ortaya çıkması, etkili tanı yöntemlerinin geliştirilmesini kolaylaştırmamaktadır.
Son zamanlarda Avrupa'da Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana ve Borrelia spielmanii gibi daha fazla çeşit ortaya çıktı. Ek olarak, vücutta Borrelia spiroketleri kistlere dönüşebilir veya vücudun bağışıklık sistemi hücrelerine erişilemeyen yerlerinde kalabilir.
Böylece bağışıklık sistemine "görünmez" olmak. Ek olarak, dokuların güçlü proinflamatuar özelliklere sahip bakteri fragmanları içerebileceği gösterilmiştir. Negatif laboratuvar test sonuçlarına rağmen, Lyme hastalığının kronik semptomlarından sorumlu olduklarına inanılıyor.
Edebiyat
1. Witecka-Knysz E. ve diğerleri Lyme hastalığı: Teşhis neden bu kadar zordur? Laboratuvar Teşhis Uzmanı Nisan 2007.
2. Moore A. ve diğerleri, Lyme Hastalığının Laboratuvar Teşhisi için Güncel Kılavuzlar, Yaygın Klinik Tuzaklar ve Gelecekteki Yönergeler, Amerika Birleşik Devletleri. Emerg Infect Dis. 2016 Temmuz; 22 (7).
3. Kene kaynaklı hastalıkların laboratuar teşhisi Çalışma Grubunun Önerileri: Ulusal Laboratuvar Teşhisçileri Odası, Ulusal Halk Sağlığı Enstitüsü-Ulusal Hijyen Enstitüsü, Bulaşıcı hastalıklar alanında Ulusal Danışman, Bulaşıcı Hastalıklar ve Nöroenfeksiyonlar Bölümü, Białystok Tıp Üniversitesi, Polonya Viroloji Derneği, Varşova 2014
4. Hosseini S. ve diğerleri: Enzime Bağlı İmmünosorbent Deneyi (ELISA) A'dan Z'ye Springer 2017.
